免疫印跡（Western Blot，WB）採用聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）對樣品中的蛋白質按照分子量進行分離，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜，NC）上。固相載體可以吸附蛋白質，並保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。轉移後的NC膜就稱為一個印跡（blot），用蛋白溶液（如5%BSA或脫脂奶粉溶液）封閉處理，封閉NC膜上的非特異結合位點。用目標蛋白的抗體（一抗）孵育NC膜，只有待研究的蛋白質才能與一抗特異結合形成抗原抗體複合物，這樣清洗除去未結合的一抗後，只有在目標蛋白上結合一抗。用一抗處。