服務簡介
技術原理 PCR技術利用螢光基團標記的反應體系，即時監測PCR進程中的螢光信號累積，檢測PCR擴增反應中每一個迴圈擴增產物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始範本進行定量分析。 服務優勢 ABI的qPCR system，靈敏，準確； Qiagen等進口試劑耗材，保證資料品質； 豐富的引物設計經驗，電泳檢測產物特異性； 根據實驗目的選擇內參，真實反映樣品間的差異。
服務內容
1. 設計並合成Realtime PCR引物
2. 引物溶解後使用Promega的TaqDNA聚合酶進行含SG（SYBR® Green）的PCR反應的優化。
3. RNA抽提
a. 若實驗物件為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿後抽提RNA。
b. 若實驗物件為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，完全吸去培養液後加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解後抽提RNA。
4. RNA品質檢測
a. 紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，以計算其濃度並評估RNA純度。
b. 使用甲醛電泳試劑（ambion）進行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。
5. cDNA合成
按照逆轉錄酶（Invitrogen或Promega）5. 使用說明將樣品RNA逆轉錄為cDNA。
6. 製備標準曲線樣品(可選)
進行相對定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進行PCR擴增， 其產物進行梯度稀釋用於做標準曲線。
7. 即時定量PCR
標準曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應液中（其中TaqBead暖開機聚合酶來自Promega公司），進行RealTime PCR擴增和檢測
8. 資料分析
檢測結果進行標準曲線分析，以對待測樣品的目的基因進行定量。相對定量實驗需要進一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差，所得結果代表某樣品的目的基因相對含量。
9. 提供實驗報告：包括詳細的實驗方法及即時螢光定量PCR實驗結果及相關圖表。